脂质指标的检测方法、性能及应用评价(5)

    MDA是由脂质代谢和花生四烯酸代谢过程中产生的一种醛类化合物。胞质中的MDA的浓度可作为机体脂质代谢整体水平的一个生物学标记。该化合物在细菌和哺乳系统中表现出致基因突变性，而在对小鼠的实验中表现出致肿瘤性。MDA是膜脂过氧化的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子间的桥键松弛，或抑制蛋白质的合成。MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。在脂质过氧化代谢产物中，MDA是最具有基因毒性的一种醛酮化合物。MDA在机体内的内源性形成以及许多有关它的基因毒性和致突变性的实验数据表明，该化合物在人类肿瘤形成过程中可能起很重要的作用，与AS的疾病进展也相关。

    HNE和MDA两者均可影响大脑认知功能，在神经系统疾病中起重要作用。目前己有学者提出HNE是预测和诊断缺血性卒中的潜在生物标记分子。临床研究中检测HNE的方法可根据标本类型或研究目的不同，如二维电泳、免疫印迹及免疫组化等，对于血液标本的检测现多采用ELISA。在MDA分析时，同HNE-样，最早采用高效液相色谱法(HPLC)或者气相色谱质谱联用法（GC-MS)，但目前一般采用硫代巴比妥酸比色法，其原理是，MDA可以与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA)缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。此法快速方便，30分钟内便可对氧化应激进行评估，操作方案简单易行，所需反应物的量较少。但是并非所有的脂类氧化体系都有MDA产生，并且有些非氧化产物干扰物也可与TBA显色，故此法不便于评价不同体系的氧情况，但仍可用于评价不同氧化阶段的氧化程度。

    (四）异前列烷

    异前列烷是在多不饱和脂肪酸的脂质过氧化过程中形成的一类化合物，有许多种类，每种类型都有多种异构体。F2-异前列焼（F2-Isoprostanes，F2-IsoP)是由花生四烯酸氧化形成的前列腺素样化合物，均由1个环戊烷和2条顺式烷基链组成，血液或尿液中的F2-IsoP水平已被广泛认为是最可靠的氧化应激生物标记分子。其中测定尿液的F2-IsoP，是一种无创的、可动力学的、能代表机体内源性F2-ISOP的方法。目前认为F2-ISOP在许多神经退行性疾病包括AD病的发病过程中，具有重要的作用，研究发现在AD患者的脑脊液中F2-IsoP水平是增加的，提示脑脊液F2-IsoP的水平可作为AD病实验室诊断和治疗的指标。也有研究证实其可作为CHD的指示剂和风险因子，对CHD早期诊断和治疗有重要作用。

    检测方法有气相色谱法（gas chromatography，GC)或液相色谱法（liquidchromatography，LC)、分离配合质谱法（mass spectrometry，MS)检测；免疫学方法（放射法或酶法）；高效液相色谱（HPLC)-串联质谱法。多数研究用GC-MS。GC-MS方法定量某些或全部可能的F2-IsoP立体异构体，而LC-MS可分离和测定特定的F2-IsoP；酶免疫(EIA)试剂盒可以敏感的特异的检测单一亚型15-F2t-IsoP。免疫亲和层析／免疫亲和柱-LC-MS是分离和检测15-F2t-IsoP的优质方法。ELA方法会存在亚型的交叉反应和代谢产物干扰现象；结合MS的方法测定结果比较接近真实值，但操作复杂且费时。

    (五）24S-羟基胆固醇

    胆固醇不能透过血脑屏障，脑内胆固醇的调节主要依靠胆固醇24S-轻化酶（cholesterol 24S-hydroxylase，CYP46)通过将胆固醇加上一个经基，转化为24S-轻化胆固醇(24S-hydroxycholesterol，24S-OH-chol)，从而通过转运机制透过血脑屏障，将脑内多余的胆固醇清除。所以24S-OH-chol，是一个脑特异性的氧化固醇指标，它容易通过血脑屏障，能准确反映脑胆固醇的生理平衡。血循环中大部分24S-OH-chol在脑内产生，并能反映脑内胆固醇的动态平衡。

    β-淀粉样蛋白是机体的正常代谢产物，但其生成增加及在脑内的沉积是一些神经退行性疾病如AD发生发展的关键因素。越来越多的证据表明胆固醇在调节β-淀粉样蛋白的代谢过程中起着重要作用。脑内胆固醇增加可能导致β-淀粉样蛋白升高，采用他汀类药物可以降低细胞内胆固醇水平，从而抑制β-淀粉样蛋白的产生。目前已有大量研究指出AD病人发病初期有较高水平的循环脑源性24S-OH-chol。当然24S-OH-chol在其他疾病中也有明显变化，如多发性硬化疾病、亨廷顿舞蹈症和血管性痴呆。

    研究中对24S-OH-chol的检测方法有多种，液相色谱-质谱法(LC-MS)、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、ELISA、氘标记的同位素稀释质谱法，其中后者最常应用。