寄生虫感染性疾病常用的病原学检测(3)

　　(三)环卵沉淀试验

　　环卵沉淀试验(circumoval precipitin test，COPT)是以血吸虫整卵为抗原的特异免疫血清学试验，卵内毛蚴或胚胎分泌排泄的抗原物质经卵壳微孔渗出与检测血清内的特异抗体结合，可在虫卵周围形成特殊的复合物沉淀，在光镜下判读反应强度并计数反应卵的百分率称环沉率。

　　【评价】

　　COPT可作为诊断血吸虫病的血清学方法之一，及临床治疗病人的依据；可用作考核治疗和防治效果的方法；并且用于血清流行病学调查及监测疫情。

　　（四）间接血凝试验

　　间接血凝试验(indirect haemagglutination test，IHA)是以红细胞作免疫配体的载体，并以红细胞凝集进行读数的血清学方法。最常用的红细胞为绵羊或人(O型)红细胞，来源方便。目前均用醛化红细胞，可保存半年而不失其免疫吸附性能。

　　【评价】

　　IHA操作简便，敏感性高，适于现场使用，可作为辅助诊断病人，流行病学调查及综合查病的方法。先后应用在多种寄生虫感染，如血吸虫，疟疾、猪囊虫，旋毛虫，肺吸虫，阿米巴，弓形虫，肝吸虫等。不足之处是不能提供检测抗体的亚型类别，和容易发生异常的非特异凝集。另外抗原的标准化，操作方法规范化亟待解决，以提高其诊断效果。

　　（五）免疫荧光法

　　免疫荧光法(immunofluorescent method，IF)是借抗原抗体反应进行特异荧光染色的诊断技术。最常用的荧光素为异硫氰基荧光素(fluorescein isothiocynate，FITC)。常用于寄生虫感染的荧光抗体染色有直接法与间接法。

　　1．直接法  用于检测抗原，其缺点是每查一种抗原必须制备与其相应的荧光标记的抗体。目前很少应用。

　　2．间接法  也称间接荧光抗体法(indirect fluorescent antibody method，IFA)。将抗原与未标记的特异性抗体(如患者血清)结合，然后使之与荧光标记的抗免疫球蛋白抗体(抗抗体)结合，三者的复合物可发出荧光。本法的优点是制备一种荧光标记的抗体，可以用于多种抗原抗体系统的检测，既可用以测定抗原，也可用来测定抗体。IFA的抗原可用虫体或含虫体的组织切片或涂片，经充分干燥后低温长期保存备用。一张载片可等距置放多个抗原位点用以同时检测多个样本或确定滴度。

　　【评价】

　　该法具有较高的敏感性、特异性和重现性，经济简便。国内外广泛应用于寄生虫病的血清学诊断，血清流行病学调查和监测疫情，如主要用于诊断疟疾、丝虫病及血吸虫病，也有用于肺吸虫病、华支睾吸虫病、包虫病及弓形虫病的血清学诊断。

　　(六)对流免疫电泳试验

　　对流免疫电泳试验(counter immunoelectrophoretic assay，CIE)是以琼脂或琼脂糖凝胶为基质的一种快速，敏感的电泳技术。

　　【评价】

　　对流电泳较简单的扩散法和常规免疫电泳法至少敏感10～20倍，方便快捷，可用己知抗原检测抗体或相反，反应结果特异，阳性反应的可信度高，适用范围广。近年来本法的改进已试用酶或放射标记的反应配体，如酶标记抗原对流免疫电泳(ELACIE)、放射对流免疫电泳自显影术(RCIEA)等。以克服电泳技术本身不够灵敏的弱点，国内在血吸虫病、肺吸虫病免疫诊断已获良好结果。国外报道应用于阿米巴病、锥虫病、棘球蚴病、旋毛蚴病、血吸虫病等血清学诊断。

　　(七)酶联免疫吸附试验

　　酶联免疫吸附试验(enzyme-1inked immunosorbent assay．ELISA)简称酶联试验，已广泛用于多种寄生虫感染的宿主体液(血清，脑脊液等)以及排泄分泌物(尿，乳，粪便等)内特异抗体或抗原微粒的检测。根据检测要求，试验可分多种类型，常用者有：用于检测抗体的间接法；检测IgM的双夹心法；检测抗原的双抗体夹心法；以固相抗体检测抗原的竞争法以及竞争抑制法等。